THẨM ĐỊNH MỘT SỐ PHƯƠNG PHÁP TÁCH CHIẾT ADN CHO PHÁT HIỆN BIẾN ĐỔI GEN

Nghiên cứu này được thực hiện để thẩm định 4 phương pháp tách chiết ADN, trong đó 3 phương pháp theo TCVN 7606: 2007 (ISO21571: 2005) bao gồm các phương pháp tách chiết ADN bằng phenol/chloroform, polyvinylpyrrovylidon (PVP) và CTAB. Phương pháp thứ tư là tách ADN bằng bộ kit Wizard clean-up (Promega). Tổng số 11 mẫu thí nghiệm chia thành năm nền mẫu hạt, bột, nước, thức ăn chăn nuôi và thực phẩm đã được khảo sát. Mỗi mẫu được tách chiết lặp lại 2 lần đối với 4 phương pháp, kèm theo các đối chứng dương tính (lá ngô), âm tính (H2 O). Kết quả cho thấy phương pháp tách chiết ADN bằng phenol/chloroform không phù hợp cho các nền mẫu nghiên cứu, trong khi phương pháp PVP có thể dùng cho nền mẫu hạt. Phương pháp CTAB cho ADN tinh sạch có nồng độ từ 10,7 ng/µl đến 234,6 ng/µl, tỉ lệ quang phổ A260/280 đạt được từ 1,68 đến 2,27. Phương pháp tách ADN bằng bộ kit Wizard clean-up (Promega) cho ADN tinh sạch có nồngđộ từ 82,8 ng/µl đến 226,2 ng/µl, tỉ lệ bước quang phổ A260/280 đạt được từ 1,8 đến 2,07. Hai phương pháp tách ADN bằng CTAB và sử dụng kit Wizard clean-up có thể sử dụng trong các phòng thí nghiệm để tinh sạch ADN cho phát hiện biến đổi gen.

This study was carried out to verify four DNA extraction methods, three in accordance with TCVN 7606: 2007 (ISO 21571: 2005) including Phenol/Chloroform, Polyvinyl-pyrrovylidon (PVP) and CTAB DNA extraction methods. The fourth method was DNA extraction using Wizard kit clean-up (Promega). A total of 11 samples were extracted, including seed/particle, powder, liquid, feed and food products. Negative control (H2 O) and positive control (maize leaves) were also included. Each sample was extracted twice in each method. The results showed that the method of extracting DNA by phenol/chloroform was not suitable for the above matrix samples while method of extracting DNA by PVP was suitable for seed/particle matrix. The DNA extraction by using CTAB was suitable for pure DNA with a concentration ranging from 40.5 ng/µl to 184.4 ng/µl, the ratio of A260/280 fluorescent gained from 1.68 to 2.27. The method of extraction by using DNA clean-up kit was suitable for pure DNA with concentrations ranging from 75.6 ng/µl to 184.4 ng/µl, the A260/280 index ranging from 1.8 to 2.07. Two DNA extraction methods of using CTAB and DNA clean-up kit were recommended for testing purposes in the GMO laboratories.