XÁC ĐỊNH SỐ LƯỢNG BẢN COPY VÀ THỂ ĐỒNG HỢP TỬ Ở CÂY LÚA CHUYỂN GEN OsNAC1 BẰNG KỸ THUẬT PCR ĐỊNH LƯỢNG THỜI GIAN THỰC

Trong cây chuyển gen, số lượng bản sao của gen chuyển ảnh hưởng lớn tới mức độ biểu hiện và sự ổn định di truyền của gen chuyển. Vì vậy, xác lượng bản sao của gen chuyển là cần thiết. Số lượng bản sao của gen chuyển thường được ước lượng bằng phân tích Southern blot. Tuy nhiên, phương pháp này thường tốn nhiều thời gian, đòi hỏi số lượng mẫu thực vật lớn và có thể phải sử dụng các đồng vị phóng xạ nguy hiểm. Vì vậy, trong thí nghiệm này đã sử dụng kỹ thuật PCR định lượng thời gian thực (qRT-PCR) để định lượng số bản copy và xác định thể đồng hợp tử của gen chuyển. Kết quả, từ 51 dòng lúa chuyển gen OsNAC1 thế hệ T0 đã xác định được 28 dòng mang một bản copy và 23 dòng mang hơn một bản copy của gen chuyển. Phân tích di truyền cho phép xác định được 13 dòng lúa thế hệ T1 mang gen ngoại sinh OsNAC1 ở thể đồng hợp tử. Các dòng lúa chuyển gen ở thể đồng hợp tử này sẵn sàng cho việc phân tích khả năng kháng hạn.

In transgenic plants, the number of transgene copies can greatly influence the level of expression and genetic stability of the target gene. The number of transgene copies are estimated by Southern blot analysis, which is laborious and time-consuming, requires relatively large amounts of plant materials, and may involve hazardous radioisotopes. The real-time PCR technique was used for estimating the number of transgene copies and homozygous in transgenic rice. As a result, 51 transgenicrice lines were obtained, including 28 lines carrying a copy, 23 lines carrying more than one copy of the integrated gene. In similar way, 13 T1 transgenic lines were indentified as homozygous. These homozygous transgenic plants are ready for drought tolerance analysis.