THU NHẬN N-ACETYL-GLUCOSAMINE TỪ CHITIN SỬ DỤNG ENZYME ENDOCHITINASE VÀ β-HEXOSAMINDASE TÁI TỔ HỢP

Chủng E.coli tái tổ hợp chứa gene mã hóa cho endochitinase từ Bacillus licheniformis DSM13 và chủng E.coli tái tổ hợp chứa gene mã hóa cho β-hexosaminidase từ Lactococus lactis ssp.lactis IL1403 được sử dụng để nuôi cấy, thu nhận và tinh sạch enzyme tái tổ hợp. Endochitinase và β-hexosaminidase tái tổ hợp được xác định đặc tính bằng cách sử dụng cơ chất tương ứng là chitin huyền phù 2% và pNp-GlcNAc 10 mM. Kết quả chỉ ra rằng: Endochitinase rất bền nhiệt, với chu kì bán hủy (t50) ở 37 và 50o C là 15 và 7 ngày ủ tương ứng, β-hexosaminidase có chu kì bán hủy ở 30o C và 37o C là 35 và 17 giờ. Thêm vào đó, endochitinase và β-hexosaminidase đều bền ở pH 6. Sản phẩm chính thủy phân chitin huyền phù 2% sử dụng endochitinase ở 50o C và β-hexosaminidase ở 30o C tại pH6 là GlcNAC.

Two separate recombinant E. coli strains containing either the mature gene encoding for endochitinase from Bacillus licheniformis DSM13, or the mature gene encoding for β-hexosaminidase from Lactococus lactis ssp.lactis IL1403 were used to culture, harvest biomass and purify recombinant enzymes. Recombinant endochitinase and β-hexosaminidase were characterized by using coloidal chitin 2% and 10 mM pNp-GlcNAc as substrate, respectively. The results showed that recombinant enzymes were thermostable, the half lives of endochitinase at 37 and 50o C were 15 days and 7 days, respectively; the half lives of β-hexosaminidase at 30 and 37o C were 35 and 17 hours. In addition, endochitinase and β-hexosaminidase were stable at pH 6. The main hydrolysis product of colloidal chitin 2% by using endochitinase at 50o C and β-hexosaminidase at 30o C and pH 6 was N-acetyl-Glucosamine.