THIẾT LẬP VÀ ĐÁNH GIÁ HIỆU QUẢ CỦA QUY TRÌNH CHUYỂN GEN VrD1 TRÊN GIỐNG ĐẬU XANH ĐX22

Trong nghiên cứu này, giống đậu xanh ĐX22 đã được ghi nhận chuyển thành công gen VrD1, mã hóa protein defensin liên quan đến cơ chế kháng mọt Callosobruchus chinensis. Trước hết, quy trình tái sinh giống ĐX22 in vitro đã được nghiên cứu và tối ưu để tạo tiền đề cho chuyển gen. Cụ thể, lá mầm được nuôi trong môi trường cảm ứng chồi chứa BAP 3,5 mg/l. Sau 15 ngày cấy chuyển, các cụm chồi được kéo dài trên môi trường có bổ sung GA3 0,5mg/l và IAA 0,1mg/l. Nghiên cứu đã chỉ ra môi trường dinh dưỡng chứa IAA 0,5mg/l thích hợp cho quá trình tạo rễ in vitro. Tiếp theo, giống ĐX22 được chuyển gen VrD1 thông qua đồng nuôi cấy với Agrobacterium mang vector pPhaso-dest-VrD1. Kết quả đã xác định được 5 dòng mang gen chuyển ở thế hệ T0 bằng kỹ thuật PCR. Trong đó, dòng ĐX1-3 và ĐX1-7 ở thế hệ T1 có biểu hiện của protein VrD1 với hàm lượng tương ứng là 6,24 và 9,26 mg/mg protein tổng số. Kết quả của nghiên cứu này đã tạo tiền đề quan trọng cho công tác chọn tạo giống đậu xanh chuyển gen có khả năng kháng C. chinensis.
 

In this study, VrD1, encoding defensin protein involved in the resistance of bruchids (Callosobruchus chinensis) has been successfully transformed into ‘ĐX22’ mungbean variety. Firstly, a protocol of regeneration of ‘ĐX22’ variety in vitro has been constructed and optimized in order to prepare for gene transformation. Particularly, cotyledonary nodes were cultured in the shoot induction medium containing 3.5 mg/l. –The shoots were then optimized elongated in the medium adding GA3 0.5 mg/l and IAA 0.1mg/l. –The medium containing IAA 0.5 mg/l was recommended for the in vitro root induction. Next, the ‘ĐX22’ explants were co-cultured with Agrobacterium strain harboring pPhaso-dest-VrD1 vector. Our results confirmed the presence of target gene in 5 T0 lines by PCR technique. Among them, ‘ĐX1-3’ and ‘ĐX1-7’ (T1 generation) were recorded to express VrD1 protein with the approximate content of 6.24 and 9.26 mg/mg total proteins, respectively. Our results could provide important information for mungbean breeding towards the C. chinensis resistance